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更新時間：2025.05.03
代謝工程方法改造大腸桿菌生產(chǎn)胸苷

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胸苷是抗艾滋病藥物司他夫定(3′-脫氧-2′,3′-雙脫氫胸苷)和疊氮胸苷的重要前體物質(zhì)。應(yīng)用代謝工程方法對大腸桿菌Escherichia coli BL21(DE3)生物合成胸苷進行了研究。通過敲除E.coli BL21嘧啶回補途徑的deo A、tdk和udp三個基因,BS03工程菌株能夠積累21.6 mg/L胸苷。為了增加合成胸苷前體物核糖-5-磷酸和NADPH的供給,進一步敲除pgi和pyr L使工程菌BS05胸苷的產(chǎn)量提高到90.5 mg/L。而通過過表達胸苷合成途徑的ush A、thy A、dut、ndk、nrd A和nrd B六個基因,菌株BS08胸苷的產(chǎn)量能達到272 mg/L。通過分批補料發(fā)酵,BS08最終可以積累1 248.8 mg/L的胸苷。本研究結(jié)果表明經(jīng)過代謝工程改造的E.coli BL21具有良好的胸苷合成能力和應(yīng)用潛力。

mRNA作為結(jié)核分支桿菌活菌檢測標(biāo)志的可行性研究

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目的　探討mRNA作為結(jié)核分支桿菌活菌檢測標(biāo)志的可行性。方法　采用定量聚合酶鏈反應(yīng) (PCR)方法測定結(jié)核分支桿菌H3 7RV 在利福平、異煙肼、乙胺丁醇、鏈霉素、氧氟沙星處理后 2 4、 4 8、 72h 85BmRNA表達水平的變化 ,并與活菌計數(shù)方法對比。結(jié)果　在異煙肼、利福平和鏈霉素處理 2 4h時 ,結(jié)核分支桿菌H3 7RV 活菌數(shù)下降明顯 ;在異煙肼、鏈霉素、乙胺丁醇及氧氟沙星各藥各濃度處理 72h時 ,活菌數(shù)相似 ,但利福平處理后活菌數(shù)較它們低。利福平處理 2 4h后 85BmRNA下降到無藥對照的 0 0 2 % ,其他藥物處理分別下降到無藥對照的 1 %～ 1 0 % ;各藥處理 72h后85BmRNA均下降到 1 %以下。結(jié)論　mRNA表達水平可以在短時間內(nèi)反映出用藥與無藥的區(qū)別 ,并與菌落形成單位 (cfu)幾乎呈平行關(guān)系。mRNA是檢測和判定結(jié)核分支桿菌“死”“活”的分子標(biāo)志物

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